Usuario:Wiki210397/Taller/Blot (Biología)
En biología molecular y genética, un blot es un método para transferir proteínas, ADN, o ARN a un portador (por ejemplo, una nitrocelulosa, polifluoruro de vinilideno (PVDF) o una membrana de nailon). En muchos casos, esto se realiza después de una electroforesis en gel, transfiriendo las moléculas del gel a la membrana o matriz de transferencia, y otras veces añadiendo las muestras directamente sobre la membrana. Después de la transferencia, las proteínas transferidas, ADN o ARN se visualizan mediante tinción con colorante (por ejemplo, tinción de plata a las proteínas), visualización autorradiográfica de moléculas marcadas radiactivas (realizadas antes de la transferencia), o marcaje específico de algunas proteínas o ácidos nucleicos. Este último se realiza con anticuerpos o sondas de hibridación que se unen solo a algunas moléculas de la transferencia y tienen una enzima unida a ellas. Después de un lavado adecuado, esta actividad enzimática (y, por lo tanto, las moléculas que se buscan en la transferencia) se visualiza por incubación con un reactivo apropiado, representando ya sea un depósito colorado sobre el blot, o una reacción quimioluminiscente que se registra por medio de una película fotográfica.
Southern blot[editar]
Un Southern blot es un método rutinariamente utilizado en biología molecular para la detección de una secuencia específica de ADN en muestras de ADN. La técnica Southern combina la transferencia de fragmentos de ADN separados por electroforesis a una membrana filtrante y posteriormente a la detección de fragmentos mediante la hibridación de la sonda.[1]
Western blot[editar]
Un Western blot se usa para la detección de proteínas específicas en muestras complejas. Las proteínas primero se separan por tamaño mediante electroforesis antes de transferirse a una membrana de transferencia apropiada (generalmente de PVDF o nitrocelulosa) posteriormente se realiza la detección con anticuerpos.[2]
Far-Western blot[editar]
Similar a un Western blot, la técnica Far-Western utiliza interacciones proteína-proteína para detectar la presencia de una proteína específica inmovilizada en una matriz de transferencia. Se usan anticuerpos para detectar la presencia del complejo proteína-proteína, lo que hace que el blot Far-Western sea un caso específico del Western blot.
Southwestern blot[editar]
Un Southwestern blot está basado en la técnica Southern, y se usa para identificar y caracterizar proteínas de unión al ADN por su capacidad de unirse a sondas de oligonucleótidos específicas.[3] Las proteínas se separan por electroforesis en gel y posteriormente se transfieren a membranas de nitrocelulosa similares a otros tipos de transferencia.
Eastern blot[editar]
Un Eastern blot se usa para la detección de modificaciones postraduccionales específicas de proteínas. Las proteínas se separan por electroforesis en gel antes de transferirse a una matriz de transferencia, después de lo cual se detectan modificaciones postraduccionales por medio de sustratos específicos (toxina del cólera, concanavalina, fosfomolibdato, etc.) o anticuerpos.
Far-Eastern blot[editar]
El Far-Eastern blot sirve para la detección de oligosacáridos ligados a lípidos. Se usa primero una cromatografía de capa fina de alto rendimiento para separar los lípidos por características físicas y químicas, luego se transfiere a una matriz de transferencia antes de que los oligosacáridos sean detectados por una proteína de unión específica (es decir, anticuerpos o lectinas).
Northern blot[editar]
El Northern blot se usa para la detección de secuencias específicas de ARN en muestras complejas. La transferencia Northern primero separa las muestras por tamaño mediante electroforesis en gel antes de que se transfieran a una matriz de transferencia y se detecten con sondas marcadas de ARN.
Northern blot Reverso[editar]
El Northern blot Reverso difiere de la transferencia Northern y Southern en que el ADN se inmoviliza primero en una matriz de transferencia, y las secuencias específicas se detectan con sondas marcadas de ARN.
Dot blot[editar]
El Dot blot es un caso especial de cualquiera de las transferencias anteriores donde el analito se agrega directamente a la matriz de transferencia (donde aparece como un "punto") en lugar de separar la muestra por electroforesis antes del borrado.
Lista de blots[editar]
- Northern blot para ARN
- Northern blot Reverso para ARN
- Western blot para proteinas
- Far-Western blot para interacciones proteína–proteína
- Eastern blotting para modificaciones posttraduccionales
- Far-Eastern blot para glucolípidos
- Dot blot
Referencias[editar]
- ↑ Towbin et al.; Staehelin, T; Gordon, J (1979). "Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications". PNAS 76 (9): 4350. doi 10.1073/pnas.76.9.4350. PubMed.
- ↑ Rojas Herrera, Dulce Carolina (2013). Fundamentos de técnicas blotting: Southern, Northern, Western. Universidad Autónoma de Sinaloa.
- ↑ «The detection of DNA-binding proteins by protein blotting». Nucleic Acids Res. 8 (1): 1-20. January 1980. PMC 327239. PMID 6243775. doi:10.1093/nar/8.1.1. Parámetro desconocido
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