Cromatografía líquida

La cromatografía líquida, también conocida como cromatografía de líquidos, es una técnica de separación y no debe confundirse con una técnica cuantitativa o cualitativa de análisis. Es una de las técnicas analíticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar físicamente los distintos componentes de una solución por la adsorción selectiva de los constituyentes de una mezcla. En toda cromatografía existe un contacto entre dos fases, una fija que suele llamarse fase estacionaria, y una móvil (fase móvil) que fluye constantemente durante el análisis, y que en este caso es un líquido o mezcla de varios de ellos. La fase estacionaria por su parte puede ser alúmina, sílice o resinas de intercambio iónico que se encuentran disponibles en el mercado. Los intercambiadores iónicos son matrices sólidas que contienen sitios activos (también llamados grupos ionogénicos) de carga electrostática (positiva o negativa). De esta forma, la muestra se fija al soporte sólido por afinidad electrostática. Dependiendo de la relación carga/tamaño algunos constituyentes de la mezcla se retendrán con mayor fuerza sobre el soporte sólido que otros, es decir serán adsorbidos, lo que provocará su separación. Las sustancias que permanecen más tiempo libres en la fase móvil avanzan más rápidamente con el fluir de la misma, y las que quedan más unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por lo tanto tardarán más en salir o fluir. Éste es el principio fundamental de la cromatografía. Un ejemplo notable es la cromatografía de intercambio iónico. Las columnas más utilizadas son las de sílice.

Métodos de cromatografía líquida

Método	Abreviatura	Mecanismo predominante
Líquido, sólido o de [[adsorcion ]]||LSC||Adsorción sobre la superficie
Líquido	LLC	Reparto entre fases líquidas, una móvil y la otra estacionaria.
Fase enlazada	BPC	Reparto y / o adsorción entre las fases móvil y enlazada.
Afinidad	--	Uso de la estructura de ligantes inmovilizados para unir bioselectivamente la proteína deseada.

Selección de un método de cromatografía líquida

El conocimiento de la estructura molecular de los componentes de la muestra puede ser muy útil en la selección de un método de cromatografía líquida. A continuación se da una guía muy general para la selección de un método.

La cromatografía de absorción opera mejor en la separación por clases de compuestos o para la separación de compuestos isoméricos. La técnica de cromatografía líquido – líquido es mejor para la separación de homólogos. Los grupos funcionales que son capaces de formar enlaces de hidrógeno fuertes se retienen mucho en cromatografía de adsorción; sin embargo la CLL (Líquido – líquido) proporciona una alternativa para la separación de estos compuestos; estas serán las muestras que tienen polaridad media.

Véase también

• Cromatografía de intercambio iónico