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Un cultivo celular en 3D es un ambiente creado artificialmente, en el cual células biológicas se les permite crecer o interactuar con su entorno en las tres dimensiones. Esta es una mejora sobre el método anterior de células que crecen en 2D (en una caja de petri) porque el modelo 3D es más preciso que los modelos de células In vivo.[1]​ Estos cultivos tridimensionales son generalmente cultivados en bioreactores, pequeñas cápsulas en las cuales las células pueden crecer en esferoides o en colonias 3D. Aproximadamente 300 esferoides son generalmente cultivados en bioreactores.[1]​

Antecedentes[editar]

Los primeros estudios realizados en los años 80, liderados por Mina Bissell del Laboratorio nacional de Lawrence Berkeley, destacaron la importancia de las técnicas 3D para la creación precisa de modelos de cultivo in vitro. Este trabajo se enfocó en la importancia de la matriz extracelular y la habilidad de cultivos en matrices artificiales en 3D para producir estructuras multicelulares fisiologicamente relevantes,como estructuras acinares en los modelos. Estas técnicas han probado ser muy importantes para modelos de enfermedades in vitro con un amplio rango de aplicaciones, incluyendo respuestas de evaluación a compuestos farmacéuticos en el descubrimiento de fármacos.

Propiedades[editar]

Los cultivos celulares en 3D son una mejora sobre los cultivos en 2D por muchas razones. En cultivos celulares vivos en microambientes 3D con intrincados de interacciones celulares y una matriz celular junto con complejos dinámicos de transporte para nutrientes y células.[2]​[3]​[4]​[5]​[6]​[7]​[8]​[9]​[10]​ Estándares 2D, o en monocapa, cell cultures son inadecuadas representaciones de éste entorno, los cuales a menudo los hace predictores poco confiables in vivo de la eficacia y toxicidad de fármacos in vivo.[11]​[12]​ 3D los esferoides se asemejan más al tejido in vivo en términos de comunicación celular y el desarrollo de matrices extracelulares.[1]​ Estas matrices ayudan a las células para sean capaces de moverse dentro de un esferoide similar a la manera en que la célula se movería en un tejido vivo .[4]​ Los esferoides son así modelos mejorados para la migración celular, Diferenciación celular, supervivencia y crecimiento diferenciación.[9]​ además, los cultivos celulares en 3D proporcionan una representación más exacta de la polarización celular 3D ya que en 2D,las células solo pueden ser polarizadas parcialmente.[4]​ por otra parte, el crecimiento de células en 3D exponen diferentes expresiones de genes que las que están cultivadas en 2D cells grown in 3D gene expression .[4]​ 

Un entorno real en 3D es algunas veces necesario para que  células in vitro para formar importantes estructuras y funciones fisiológicas. La tercera dimensión del crecimiento celular genera un mayor espacio de contacto para las entradas de contactos mecánicos y para la adhesión celular. cell adhesion, la cual es necesaria para la ligación de la  integrina , la concentración celular e incluso la señalización intracelular .[13]​[14]​ Normal solute diffusion and binding to effector proteins (like growth factors and enzymes) is also reliant on the 3D cellular matrix, so it is critical for the establishment of tissue scale solute concentration gradients [15]​[16]​

Para las propuestas de fármacos toxicology screening, es mas útil ensayos de expresión génica de crecimiento de células in vitro en 3D más que 2D, desde que la expresión génica de los esferoides 3D serán más cercanos a parecerse a la expresión génica in vivo. Ultimamente, los cultivos 3D tiene una gran estabilidad y vidas más largas que los cultivos celulares in 2D.[17]​ Esto significa que son más adecuados para estudios a largo plazo y para la demostración a largo plazo del fármaco. Otra razón para esto es que el entorno 3D permite a las células crecer si molestias . En 2D, las células deben someterse a tripzinización regular con el fin de proporcionarles suficientes nutrientes para un crecimiento celular..[18]​ esferoides 3D han sido cultivados en un laboratorio para un máximo de 302 día mientras que todavía se mantiene un crecimiento saludable.[17]​

Métodos[editar]

Ahora, hay un gran número de herramientas de cultivo disponibles comercialmente que afirman proporcionar del cultivo celular en 3D. Las principales categorías son matrices extracelulares o andamios extracellular matrices, superficies modificadas, bioreactores rotatorios bioreactors, microtransportadores, cultivo celular en 3D por levitación magnética cultivo celular en por levitación magnética, placas de gota colgante, and Bioimpresión magnética en 3D. Los bioreactores utilizados para cultivos celulares en 3D son cámaras cilíndricas de plástico pequeñas que son especialmente diseñadas para el propósito del crecimiento celular en tres dimensiones. El bioreactor utiliza materiales sintéticos bioactivos como membranas de tereftalato polietileno para rodear a las células esferoides en un ambiente que mantenga altos niveles de nutrientes.[19]​[20]​ son fáciles de abrir y cerrar , así que las células esferoides pueden ser removidas para ensayos, aún así la cámara es capaz de mantener el 100 % de humedad .[1]​Esta humedad es importante para alcanzar un crecimiento máximo de células.La cámara del bioreactor es parte de un gran dispositivo que rota para asegurarse que el crecimiento celular sea igual en cada dirección a través de las tes dimensiones.[1]​
MC2 Biotek se ha desarrollado un bioreactor para incubar proto-tejidos que utilizan intercambio de gases para mantener altos niveles de oxigeno dentro de la cámara.[21]​ Esto es una mejora sobre los bioreactores anteriores porque un alto nivel de oxigeno ayuda al crecimiento celular y respiración celular normal.[9]​

Microfluidica[editar]

Las diversas estructuras celulares en el cuerpo deben estar vascularizadas para recibir los nutrientes y el intercambio de gases, ayuda que necesitan para sobrevivir. Similarmente, los cultivos celurares in vitro 3D requieren ciertos niveles de circulación de fluido, el cual puede ser una problemática para la densidad vascularizada de intercambio de gases, Los cultivos en 3D donde las células quizás no tienen la exposición adecuada a los nutrientes . Esta es un particularidad importante en los cultivos de hepatócitos hepatocyte debido a que el hígado es un órgano altamente vascularizado. Un estudio de hepatócitos cultivados junto con células vasculares en andamio de colágeno en gel entre canales de microfluidos colageno microfluidica, y el crecimiento en comparación de las células en entornos estáticos y fluidos, mostró la necesidad de modelos con los tejidos y una red microvascular. [22]​

farmacología/Toxicología[editar]

El propósito principal de crecimiento de células esferoides in vitro en 3D, es un examen farmacocinético y farmacodinámico de los efectos de los fármacos en ensayos preclínicos.[9]​ Toxicologyestudios han demostrado cultivos de células en 3D para ser casi a la par con estudios in vivo para los propósitos de la prueba de toxicidad de compuestos de fármacos toxicity. Al comparar valores LD50 de 6 fármacos comunes : acetaminophen, amiodarone, diclofenac, metformin, phenformin, and valproic acid, los valores de esferoides en 3D son correlacionados directamente con aquellos estudios in vivo. .[23]​ Aunque los cultivos en 2D han sido previamente utilizados para ensayos de toxicidad con estudios in vivo, los esferoides en 3D son mejores en ensayos crónicos de toxicidad expuesta.[24]​El acuerdo tridimensional permite a los cultivos proporcionar un modelo más precisión en parecerse a los tejidos humanos in vivo sin utilizar animales para pruebas.

Críticas[editar]

Todos los diferentes métodos de cultivos 3D afirman la facilidad relativa para usar y producir estructuras en 3D semejantes y mejorados en técnicas in vivo comparada con métodos en 2D.como sea, ninguno de los métodos 3D han sido remplazados en cultivos 2D en mayor escala, incluyendo en el desarrollo del proceso de fármacos including in the drug development. Existentes métodos 3D no son limitantes,incluyendo escalabilidad,reproductibilidad, sensibilidad y compatibilidad que son instrumentos de proyección with high-throughput screening (HTS). instrumentos. HTS basados ​​en células se basa en la determinación rápida de la respuesta celular a la interacción de drogas, tales como la dosis dependiente de la viabilidad celular, interacción célula-matriz, y / o la migración celular, pero los ensayos disponibles no están optimizados para el cultivo de células 3D. El próximo reto que enfrenta el cultivo de células en 3D es la cantidad limitada de datos / publicaciones que abordan los mecanismos de interacción de medicamentos, la diferenciación celular y de señalización celular in vitro en entornos 3D y se correlacionan con los resultados in vivo la respuesta al fármaco. Aunque el número de publicaciones de cultivo celular 3D está aumentando rápidamente, la actual caracterización bioquímica limitada de tejido 3D disminuye la confianza necesaria para impulsar la adopción de nuevos métodos. La velocidad a la que se cumplen estos desafíos determinará el ritmo al que el cultivo de células en 3D es adoptado como una herramienta rutinaria.

Hay también más problemas utilizando esferoides como modelo de tejidos cancerosos, aunque benéficos para los cultivos 3D, esferoides de tumores han sido criticados por ser un reto o imposible para manipular gradientes de moléculas solubles en esferoides en 3D, y y para caracterizar células en estos gradientes complejos, diferente a los artículos de apoyo de cultivos celulares en 3D para tejidos basados en bioensayos explorados por Ratmir et al.[25]​

Referencias[editar]

  1. ↑ a b c d e Fey, Stephen; Wrzesinski, Krzysztof (2013). «5». En Boucher, Alexis, ed. Valproic Acid. Nova Science Publishers, Inc. pp. 141-165. ISBN 978-1-62417-952-5. 
  2. ↑ Marx, Vivien (11 April 2013). «A Better Brew». Nature. Consultado el July 9, 2013. 
  3. ↑ Souza, Glauco (14 March 2010). «Three-dimensional tissue culture based on magnetic cell levitation». Nature Nanotechnology 5 (4): 291-296. doi:10.1038/nnano.2010.23. Consultado el July 9, 2013. 
  4. ↑ a b c d Pampaloni, Francesco (October 2007). «The third dimension bridges the gap between cell culture and live tissue». Nature Reviews 8 (10): 839-845. doi:10.1038/nrm2236. Consultado el July 9, 2013. 
  5. ↑ Boudreau, Nancy (5 de mayo de 2006). «A pericellular collagenase directs the 3-dimensional development of white adipose tissue». Cell 125 (3): 577-91. PMID 16678100. doi:10.1016/j.cell.2006.02.050. Consultado el July 9, 2013. 
  6. ↑ Yamada, KM (24 August 2007). Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D 130 (4). pp. 601-10. PMID 17719539. doi:10.1016/j.cell.2007.08.006. Consultado el July 9, 2013. 
  7. ↑ Friedrich, Seidel (12 February 2009). «Spheroid-based drug screen: considerations and practical approach». Nature Protocols 4 (3): 309-324. doi:10.1038/nprot.2008.226. Consultado el July 9, 2013. 
  8. ↑ Prestwich, Glenn (15 August 2007). Simplifying the extracellular matrix for 3-D cell culture and tissue engineering: a pragmatic approach. 101 (6). pp. 1370-83. PMID 17492655. doi:10.1002/jcb.21386. Consultado el July 9, 2013. 
  9. ↑ a b c d Griffith, Linda; Melody A. Swartz (March 2006). «Capturing complex 3D tissue physiology in vitro». Nature Reviews 7 (3): 211-224. doi:10.1038/nrm1858. Consultado el July 9, 2013. 
  10. ↑ Lee, J; Cuddihy MJ, Kotov NA. (14 March 2008). Three-dimensional cell culture matrices: state of the art. 14 (1). pp. 61-86. PMID 18454635. doi:10.1089/teb.2007.0150. 
  11. ↑ Haycock JW. (2011). «3D cell culture: a review of current approaches and techniques.». Methods Mol Biol. 695: 1-15. doi:10.1007/978-1-60761-984-0_1. 
  12. ↑ Prestwich, G.D. (15 August 2007). Simplifying the extracellular matrix for 3-D cell culture and tissue engineering: a pragmatic approach. 101 (6). pp. 1370-83. PMID 17492655. doi:10.1002/jcb.21386. Consultado el July 9, 2013. 
  13. ↑ Suuronen, E. J.; Sheardown, H., Newman, K.D., McLaughlin, C.R. & Griffith, M. (2005). «Building Los modelos in vitro Organs». Building in vitro Models of Organs 244: 137-173. doi:10.1016/s0074-7696(05)44004-8. 
  14. ↑ Louekari, K (2004). «Status y prospectos de examenes and prospects of in vitro tests and risk assessment». Altern. Lab. Anim 32: 431-435. 
  15. ↑ Knight, B.; et al. (2000). «Visualizing Muscle Cell Migration in situ». Curr. Biol. 10: 576-585. doi:10.1016/s0960-9822(00)00486-3. 
  16. ↑ Roskelley, CD; Desprez PY, Bissell MJ (1994). «Extracellular matrix-dependent tissue-specific gene expression in mammary epithelial cells requires both physical and biochemical signal transduction.». Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 12378-12382. doi:10.1073/pnas.91.26.12378. 
  17. ↑ a b Krzysztof Wrzesinski et al. (2013). «HepG2/C3A spheroids exhibit stable physiological functionality for at least 24 days after recovering from trypsinisation». Toxicol. Res. 2: 163-172. doi:10.1039/C3TX20086H. 
  18. ↑ «After trypsinisation, los esferoides 3D de los hepatócitos necesitan 18 días para re-establecer los niveles similares de funciones fisiológicas clave C3A spheroids of C3A hepatocytes need 18 days to re-establish similar levels of key physiological functions to those seen in the liver». 
  19. ↑ Du, Yanan (January 2008). «Synthetic sandwich culture of 3D hepatocyte monolayer». Biomaterials 29 (3): 290-301. PMID 17964646. doi:10.1016/j.biomaterials.2007.09.016. 
  20. ↑ Derda, Ratmir; et al. (2009). «Paper-Supported 3D Cell Culture for Tissue-Based Bioassays». Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106 (44). doi:10.1073/pnas.0910666106. 
  21. ↑ Fey, Stephen J. WO2012022351. European Patent Register. 
  22. ↑ Chung, Seok; Kamm, Roger D., Sudo, Ryo, et al. (July 2009). «Transport-Mediated Angiogenesis in 3D Epithelial Coculture». The Journal of the Federation of American Societies for Experimental Biology (FASEB) 23 (7): 2155-2164. 
  23. ↑ Fey, Stephen J. (June 2012). «Determinación de la toxicidad del fármaco utilizando esferoides en 3D construidos de un epatócito From an Immortal Human Hepatocyte Cell Line». Toxicological Sciences 127 (2): 403-11. PMID 22454432. doi:10.1093/toxsci/kfs122. 
  24. ↑ Messner, S; Agarkova, I., Moritz, W., & Kelm, J. M. (August 2012). «Multi-cell type human liver microtissues for hepatotoxicity testing». Archives of Toxicology 87 (1): 209-213. doi:10.1007/s00204-012-0968-2. 
  25. ↑ Ratmir, D; et al. (2009). «Paper-Supported 3D Cell Culture for Tissue-Based Bioassays». Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 106 (44). doi:10.1073/pnas.0910666106. 
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