Prueba de la Oxidasa

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DMFD
TMFD

La prueba de oxidasa es una prueba usada en microbiología para determinar si una bacteria produce alguna de las citocromo c oxidasas.[1] La prueba hace uso de discos impregnados con el reactivo N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina (o TMFD) o N,N-Dimetil-p-fenilendiamina (o DMFD), el cual también es un indicador redox. El reactivo pasa de azul oscuro a granate al ser oxidado, y se vuelve transparente al ser reducido. Las bacterias oxidasa positiva poseen citocromo oxidasa o indofenol oxidasa (una hemoproteína).[2] Ambas catalizan el transporte de electrones de compuestos donantes (NADH) a receptores de electrones (por lo general el oxigeno). En la prueba, el reactivo TMFD actúa como donante artificial de electrones para la enzima oxidasa. El reactivo oxidado forma el compuesto coloreado de indofenol azul. El sistema citocromo esta normalmente presente solo en los organismos aerobios capaces de usar el oxigeno como aceptor final de hidrogeno. El producto final de este metabolismo puede ser agua o peroxido de hidrogeno.[3]

Clasificación[editar]

La prueba separa en las posibles cepas Oxidasa positiva u oxidasa negativa.

Oxidasa positiva[editar]

Significa que la bacteria si posee citocromo c oxidasa, por lo que puede usar oxigeno en la producción de energía con una cadena de transporte de electrones. Un ejemplo de identificación pre-eliminar es la identificación de los géneros Neisseria y Moraxella, los cuales ambos son diplococos Gram-negativos oxidasa positiva. Muchos Gram-negativos, como los bacilos curvados como Helicobacter pylori, Vibrio cholerae y Campylobacter jejuni son oxidasa positiva.

Oxidasa negativa[editar]

Las enterobacterias son las típicas oxidasa negativa.[4] El que no la poseen significa que no puede usar el oxigeno en la cadena de transferencia de electrones o aplican una citocromo diferente para transferir electrones al oxigeno.

Procedimiento[editar]

  1. Cada disco se moja con unas cuatro asadas de agua desionizada.
  2. Con el asa bacteriológica se transfiere una gran masa de bacteria pura al disco
  3. Se observa el disco por tres minutos, en ese tiempo el área de inoculación debe pasar entre azul oscuro y granate o incluso negro, entonces los resultados son positivos. Si no hay cambio en esos tres minutos, la prueba es negativa.

La prueba también es posible de hacer en placas de Agar Tripticasa soya con la bacteria inoculada en línea y poniendo 2-3 gotas del reactivo en la superficie de cada organismo a poner a prueba.

Referencias[editar]

  1. «Prueba modificada de Oxidasa» (en inglés). Consultado el 31 de enero de 2012.
  2. . Isenberg HD, editor. Clinical Microbiology Procedures Handbook. American Society for Microbiology; 2004. p. 3.3.2-3.3.2.13
  3. MacFaddin JF, editor. Biochemical Tests for Identification of Medical Bacteria. 3rd ed. Philadelphia:Lippincott Williams and Wilkins; 2000. p. 363-7
  4. Farmer JJ, Fanning GR, Huntley-Carter GP, et al. (1981). Kluyvera, a new (redefined) genus in the family Enterobacteriaceae: identification of Kluyvera ascorbata sp. nov. and Kluyvera cryocrescens sp. nov. in clinical specimens. 13.  pp. 919-33. PMID 7240403. http://jcm.asm.org/cgi/pmidlookup?view=long&pmid=7240403.