Caldo de Lisogenia
El Caldo de Lisogenia (CL) es un medio nutricionalmente rico, se utiliza principalmente para el crecimiento de bacterias.
El acrónimo se ha interpretado erróneamente como caldo Luria, caldo Lennox, o medio Luria-Bertani, de acuerdo con su creador Giuseppe Bertani, el CL abreviatura estaba destinado en realidad a pie de caldo lisogenia.
Descripción
La fórmula de medio CL fue publicado en 1951 en el primer documento de Bertani en lisogenia. En este artículo se describe la modificación de un solo estallido experimento y el aislamiento de los fagos P1, P2 y P3. Él había desarrollado el medio CL para optimizar el crecimiento de Shigella y la formación de placas.
Las formulaciones de medios han sido un estándar industrial para el cultivo de la Escherichia coli y estas se remontan a la década de 1950. Estos medios se han utilizado ampliamente en aplicaciones de la microbiología molecular para la preparación del plásmido de ADN y proteínas recombinantes. Sigue siendo uno de los medios más utilizados para el mantenimiento y cultivo de cepas de laboratorio recombinante de Escherichia coli para estudios fisiológicos. Sin embargo, el uso de medio LB se debe evitar.[1]
Existen varias fórmulas comunes de la LB. A pesar de que son diferentes, por lo general comparten una composición similar de los ingredientes utilizados para promover el crecimiento, incluyendo las siguientes:
- Péptidos y peptonas de caseína
- Vitaminas (vitaminas del complejo B)
- Oligoelementos (por ejemplo, nitrógeno, magnesio, azufre,)
- Minerales
Péptidos y peptonas son proporcionados por triptona. Vitaminas y determinados oligoelementos son proporcionados por el extracto de levadura. Los iones de sodio para el transporte y el equilibrio osmótico se proporcionan por el cloruro de sodio. Bacto-triptona se utiliza para proporcionar los aminoácidos esenciales para el crecimiento de bacterias, mientras que el extracto de Bacto-levadura se utiliza para proporcionar una gran cantidad de compuestos orgánicos útiles para el crecimiento bacteriano.[2]
En su publicación original de 1951, Bertani usó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por 1L de solución; Luria en su "L broth" de 1957 copió exactamente la receta original de Bertani. Las recetas publicadas posteriormente en general eliminan la glucosa.
Fórmula
La fórmula generalmente difiere en la cantidad de cloruro sódico, para así proveer de las condiciones osmóticas adecuadas para una cepa bacteriana concreta y unas condiciones de cultivo deseadas. Las fórmulas bajas en sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.
LB-Miller (10 g/L NaCl) LB-Lennox (5 g/L NaCl) LB-Luria (0.5 g/L NaCl)
Preparación
Método común para la preparación de un litro de LB:
- Medir los siguientes:
- 10 g Triptona
- 5 g Extracto de levadura
- 10 g NaCl
- Suspender los sólidos en ~800 ml de agua destilada o desionizada..
- Añadir más agua destilada o desionizada, en una probeta graduada para asegurar la precisión, para hacer un total de 1 litro.
- Autoclave a 121 ° C.
- Después de enfriar, agitar el frasco para asegurar la mezcla, y el CL está listo para su uso.
[3]
Ajuste de PH
Antes de la esterilización en autoclave, en algunos laboratorios se ajusta el pH de LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad de amortiguación de los medios de comunicación, y esto se traduce en cambios rápidos en el pH durante el cultivo de bacterias. Como resultado, algunos laboratorios ajustan el pH de LB con 5.10 mmol / L TRIS buffer, se diluye a partir de 1 mol / L de valores TRIS.
Referencias
- ↑ Bertani, G. (1951). Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli. J. Bacteriol. 62:293-300. PMID 14888646 PDF
- ↑ http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html
- ↑ Anderson, E. H. (1946). Growth requirement of virus-resistant mutants of Escherichia coli strain B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 32:120-128. PMID 16588724
- ↑ Luria, S. E., and J. W. Burrous. (1957). Hybridization between Escherichia coli and Shigella. J. Bacteriol. 74:461-476. PMID 13475269 PDF
- ↑ Lennox, E. S. (1955). Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1. Virology. 1:190-206. PMID 13267987
- ↑ Luria, S. E., J. N. Adams, and R. C. Ting. (1960). Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology. 12:348-390. PMID 13764402
- ↑ Miller, J. H. (1972). Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
- ↑ Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis. (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.