Caldo de Lisogenia

De Wikipedia, la enciclopedia libre
Esta es una versión antigua de esta página, editada a las 12:28 9 oct 2019 por Aosbot (discusión · contribs.). La dirección URL es un enlace permanente a esta versión, que puede ser diferente de la versión actual.
Este artículo o sección necesita una revisión de ortografía y gramática.
Puedes colaborar editándolo. Cuando se haya corregido, puedes borrar este aviso. Si has iniciado sesión, puedes ayudarte del corrector ortográfico, activándolo en: Mis preferencias → Accesorios → Navegación → El corrector ortográfico resalta errores ortográficos con un fondo rojo.
Uso de esta plantilla: {{sust:Copyedit}}

El Caldo de Lisogenia (abreviado LB en inglés) es un medio nutricionalmente rico que se utiliza principalmente para el cultivo de bacterias.

El acrónimo LB se ha interpretado erróneamente como caldo Luria, caldo Lennox, o medio Luria-Bertani. De acuerdo con su creador Giuseppe Bertani, la abreviatura "LB" era de "Lysogeny Broth".

Descripción

La fórmula de medio LB fue publicada en 1951 en el primer documento de Bertani en lisogenia. En este artículo, se describe la modificación de un solo estallido experimento y el aislamiento de los fagos P1, P2 y P3. Bertani había desarrollado el medio LB para optimizar el crecimiento de la bacteria Shigella y formar placas virales.[1]​

Distintas formulaciones de este medio han constituido un estándar industrial en el cultivo de Escherichia coli desde los años 50. Estos medios se han utilizado ampliamente en microbiología molecular para preparar plásmidos de ADN y proteínas recombinantes. Sigue siendo uno de los medios más utilizados para cultivar y mantener cepas recombinantes de E. coli en laboratorio. Sin embargo, el medio LB se debe evitar en estudios fisiológicos debido a las limitaciones de aminoácidos y péptidos como nutrientes[2]​.

Existen varias fórmulas comunes del medio LB. A pesar de que son diferentes, comparten una composición similar de los ingredientes utilizados para promover el crecimiento, incluyendo las siguientes:

  • Péptidos y peptonas de caseína
  • Vitaminas (vitaminas del complejo B)
  • Oligoelementos (por ejemplo, nitrógeno, magnesio, azufre,)
  • Minerales

Péptidos y peptonas son proporcionados por triptona. Vitaminas y determinados oligoelementos son proporcionados por el extracto de levadura. Los iones de sodio para el transporte y el equilibrio osmótico se proporcionan por el cloruro de sodio. Bacto-triptona se utiliza para proporcionar los aminoácidos esenciales para el crecimiento de bacterias, mientras que el extracto de Bacto-levadura se utiliza para proporcionar una gran cantidad de compuestos orgánicos útiles para el crecimiento bacteriano.[3]​

En su publicación original de 1951, Bertani usó 10 gramos de NaCl y 1 gramo de glucosa por 1L de solución. Luria en su "L broth" de 1957 copió exactamente la receta original de Bertani. Las recetas publicadas posteriormente en general eliminan la glucosa.

Fórmula

La fórmula generalmente difiere en la cantidad de cloruro sódico, para así proveer de las condiciones osmóticas adecuadas para una cepa bacteriana concreta y unas condiciones de cultivo deseadas. Las fórmulas bajas en sal, Lennox y Luria, son ideales para cultivos que requieren antibióticos sensibles a la sal.

LB-Miller (10 g/L NaCl) LB-Lennox (5 g/L NaCl) LB-Luria (0.5 g/L NaCl)

Preparación

Método común para la preparación de un litro de LB:

  • Suspender los sólidos en ~800 ml de agua destilada o desionizada..
  • Añadir más agua destilada o desionizada, en una probeta graduada para asegurar la precisión, para hacer un total de 1 litro.
  • Autoclave a 121 ° C.
  • Después de enfriar, agitar el frasco para asegurar la mezcla, y el LB está listo para su uso[4]​.

Ajuste de PH

Antes de la esterilización en autoclave, en algunos laboratorios se ajusta el pH de LB a 7,5 u 8 con hidróxido de sodio. Sin embargo, el hidróxido de sodio no proporciona ninguna capacidad de amortiguación de los medios de comunicación, y esto se traduce en cambios rápidos en el pH durante el cultivo de bacterias. Como resultado, algunos laboratorios ajustan el pH de LB con 5.10 mmol / L TRIS buffer, se diluye a partir de 1 mol / L de valores TRIS.

Referencias

[5]​ [6]​ [7]​ [8]​ [9]​

  1. ↑ Bertani, G. (1951). Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli. J. Bacteriol. 62:293-300. PMID 14888646 PDF
  2. ↑ Nikaido, H. (2009). The Limitations of LB Medium. Small things considered - The Microbe Blog. ASM. http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html
  3. ↑ http://schaechter.asmblog.org/schaechter/2009/11/the-limitations-of-lb-medium.html
  4. ↑ Anderson, E. H. (1946). Growth requirement of virus-resistant mutants of Escherichia coli strain B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 32:120-128. PMID 16588724
  5. ↑ Luria, S. E., and J. W. Burrous. (1957). Hybridization between Escherichia coli and Shigella. J. Bacteriol. 74:461-476. PMID 13475269 PDF
  6. ↑ Lennox, E. S. (1955). Transduction of linked genetic characters of the host by bacteriophage P1. Virology. 1:190-206. PMID 13267987
  7. ↑ Luria, S. E., J. N. Adams, and R. C. Ting. (1960). Transduction of lactose-utilizing ability among strain of E. coli and S. dysenteriae and the properties of the transducing phage particles. Virology. 12:348-390. PMID 13764402
  8. ↑ Miller, J. H. (1972). Experiments in molecular genetics. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
  9. ↑ Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis. (1989). Molecular cloning: a laboratory manual, 2nd edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, New York.
Obtenido de «https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Caldo_de_Lisogenia&oldid=120105492»