Sonda de hibridación

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Una sonda de hibridación en Biología Molecular es un fragmento de ADN o ARN de longitud variable (normalmente 100-1000 bases), que se utiliza en el ADN o ARN de muestras para detectar la presencia de nucleótidos secuencias (la meta de ADN) que son complementarios a la secuencia de la sonda.

La sonda de lo que se hibrida es una sola cadena de ácidos nucleicos (DNA o RNA) cuya secuencia de bases permite que la sonda objetivo complete los pares de bases, debido a la complementariedad entre la sonda y el objetivo de ING.

La sonda marcada primero es desnaturalizada (por calentamiento intenso o bajo condiciones alcalinas tales como la exposición a la hidróxido de sodio) en el ADN de cadena sencilla (ssDNA) y luego hibridada al ssDNA (Southern blot) o al ARN (northern blot) inmovilizado en una membrana o in situ.[1]

Para detectar la hibridación de la sonda con su secuencia diana, la sonda se marca (o etiqueta) con un marcador molecular de moléculas fluorescentes o radiactivas o (más recientemente). Los marcadores utilizados son . P 32 (un isótopo radioactivo de fósforo incorporado en el enlace fosfodiéster en el ADN de la sonda) o digoxigenina, que no está basada en anticuerpos radiactivos marcados.

Las secuencias de ADN o ARN transcritos que tienen de moderada a alta similitud de secuencia con la sonda son detectadas mediante la visualización de la sonda hibridada por autorradiografía u otras técnicas de imagen. Normalmente, ya sea imágenes de rayos X se toman del filtro o el filtro se coloca bajo luz ultravioleta.

La detección de las secuencias con similitud moderada o alta depende de lo estrictas que fueran las condiciones de hibridación aplicadas:si son de alto rigor, tales como temperatura de hibridación alta y alta salinidad de los tampones de hibridación, sólo permiten la hibridación entre ácidos nucleicos con secuencias muy similares, mientras que si son de baja severidad, como la reducción de la temperatura y la sal, la hibridación permite que las secuencias sean menos similares. Sondas de hibridación de ADN utilizado en microarreglos s se refieren a ADN covalentemente a una superficie inerte, como láminas de vidrio recubiertos o chips de genes, y que es un blanco móvil de ADNc hibridado.

Dependiendo del método que se use, la sonda puede sintetizada utilizando el método de fosforamidita o generada y etiquetada mediante amplificación por PCR y la clonación (los métodos más antiguos). Con el fin de aumentar la estabilidad in vivo de la sonda de ARN no se utiliza, en lugar de ARN análogos se puede utilizar, en particular, morfolino. Molecular del ADN o sondas de ARN basados ​​son ahora rutinariamente utilizados en las bibliotecas de genes de selección, la detección de secuencias de nucleótidos con los métodos de borrar, y en las tecnologías de otros genes, como los microarrays.

Algunos tipos de sondas[editar]

Sondas Scorpion®

Sondas Molecular Beacon

Sondas TaqMan®

Sondas LNA® (Locked Nucleic Acid)

Cycling Probe Technology (CPT)

Uso en la ciencia forense[editar]

En la ciencia forense, sondas de hibridación se utilizan, por ejemplo, para la detección de repeticiones en tándem cortas ( microsatélites) y en las regiones RFLP, todos los cuales son ampliamente utilizados como parte del análisis del ADN.

[2]

Referencias[editar]

  1. Southern, Edwin Mellor (5 de noviembre de 1975). «Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis». Journal of Molecular Biology 98 (3):  pp. 503–517. doi:10.1016/S0022-2836(75)80083-0. ISSN 0022-2836. PMID 1195397. 
  2. Desmond S. T. Nicholl. (2008). Genetic Engineering (en inglés) (3ra edición). Cambridge.