Microscopio de fluorescencia

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El microscopio de fluorescencia Olympus BX61, acoplado con una cámara digital.

El microscopio de fluorescencia... es una variación del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiación electromagnética emitida por las moléculas que han absorbido la excitación primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Para dejar pasar sólo la emisión secundaria deseada, se deben colocar filtros apropiados debajo del condensador y encima del objetivo. Se usa para detectar sustancias con autofluorescencia (vitamina A) o sustancias marcadas con fluorocromos.

Fluorescencia y microscopio[editar]

Estructura de un microscopio de fluorescencia

El fenómeno de la fluorescencia se produce cuando un electrón de un átomo absorbe toda la energía de una determinada longitud de onda de la luz, saltando a otros orbitales. Es una situación inestable durante la cual se emite la mayor parte de la energía que se ha absorbido (con mayor longitud de onda) y vuelve a desplazarse a su orbital.

Aprovechando este fenómeno, se han creado los flurocromos. Para utilizarlos necesitamos una bombilla que emita luz ultravioleta y luz visible. Para excitar el flurocromo necesitamos un filtro. de excitación que seleccione la longitud de onda que excita nuestro flurocromo. Los más comunes son el DAPI que tiñe el núcleo de las células y el GFP.

Una muestra de esperma de arenque teñida con SYBR Green en una cubeta iluminada con luz azul en un microscopio de epifluorescencia. El SYBR Green se liga al ADN del esperma y, una vez ligado, fluoresce emitiendo luz verde cuando se lo ilumina con luz azul.