Buffer NUN

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NUN buffer es una disolución que hace posible purificar proteínas localizadas en el núcleo de las células eucariotas.[1] Aunque existen otros procedimientos[2] suelen conllevar la pérdida de la proteína de unión al promotor del sitio D de la albúmina (DBP) la cual es indeseada si se va a realizar una investigación de los recorridos que realizan las señales nucleares. Por ello, en 1993 un nuevo procedimiento de extracción fue desarrollado para incrementar la recuperación de proteínas no-histónicas usando una disolución (NUN) que contenía 0.3 M NaCl, 1 M urea, y 1% detergente Nonidet P-40 no iónico, la cual desestabiliza los puentes salinos, los enlaces de hidrógeno, y las interacciones hidrofóbicas, respectivamente; concluyendo en una ruptura de las interacciones entre las proteínas y el ADN. En cambio, incubando núcleos en un buffer NUN y centrifugando la disolución, el líquido sobrante aún contendrá proteínas nucleares.

El buffer NUN contiene: HEPES [pH 7.6], Urea, NaCl, DDT, PIC 1 & 2, 1.1% NP-40, Ortovanadato de sodio, β-glicerol fosfato y agua.

Referencias[editar]

  1. Lavery DJ, Schibler U, "Circadian transcription of the cholesterol 7-α hydroxylase gene may involve the liver-enriched bZIP protein DBP", Genes Dev., 7, 1871-1884.
  2. Gorski K, Carneiro M, Schibler U, "Tissue-specific invitro transcription from the mouse albumin promoter", Cell, 47, 767-776.